Многопоточность в python

Я не знаю сами вы придумали или вам кто-то подсказал, но никогда не объединяйте
tkinter и PyQt, да еще и используя модуль threading - это гремучая смесь.
tkinter и PyQt5 используют свой собственный цикл событий.

Никакие виджеты пользовательского интерфейса не должны быть доступны или созданы вне основного потока Qt, это справедливо также для элементов пользовательского интерфейса. Вы не можете установить фильм в отдельный поток, но и не можете создать там QMovie.

Я не знаю что вы планируете делать в дополнительном потоке и нужен ли он вам вообще.

Если реализовать, из того что я понял, на PyQt,
то используйте сигналы и слоты - они предназначены для работы между потоками и выглядит это примерно так:

import sys
from PyQt5 import QtCore, QtGui, QtWidgets
from PyQt5.Qt import *


class WorkThread(QtCore.QThread):
    threadSignal = QtCore.pyqtSignal(int)

    def __init__(self, numStart, numEnd):
        super().__init__()
        self.numStart = numStart
        self.numEnd = numEnd
        self.threadStop = False

    def run(self):
        # имитируем какую-то работу в потоке
        for i in range(self.numStart, self.numEnd):
            self.msleep(100)           
            if self.threadStop:
                break
            self.threadSignal.emit(i)
        self.finished.emit()


class MainWindow(QMainWindow):
    def __init__(self):
        super().__init__()
        
        self.thread = None
        self.movie = None
        self.numStart = 0
        self.numEnd = 1_000
        
        self.centralWidget = QtWidgets.QWidget()
        self.centralWidget.setObjectName("centralWidget")
        self.setCentralWidget(self.centralWidget)
        
        self.button = QPushButton(self)
        self.button.setObjectName("button")
        self.button.setCheckable(True)
        self.button.setIcon(QIcon('off.png'))
        self.button.setIconSize(QSize(70, 70))
        self.button.clicked.connect(self.button_clicked)

        self.label = QtWidgets.QLabel(alignment=Qt.AlignCenter)
        self.label.setObjectName("label")
        self.layout = QGridLayout(self.centralWidget)
        self.layout.addWidget(self.label, 0, 0, 3, 1)
        self.layout.addWidget(self.button, 1, 1, 1, 1)
        self.layout.setColumnStretch(0, 1)

    def button_clicked(self):
        if self.button.isChecked():
            self.button.setIcon(QIcon('on.png'))
            self.show_movie()
        else:                             
            self.button.setIcon(QIcon('off.png'))
            if self.thread: self.thread.threadStop = True
 
    def show_movie(self):
        self.label_movie = QtWidgets.QLabel()
        self.label_movie.setAttribute(
            QtCore.Qt.WA_TranslucentBackground, True)
        self.label_movie.setWindowFlags(
            self.windowFlags() | 
            QtCore.Qt.FramelessWindowHint | 
            QtCore.Qt.WindowStaysOnTopHint
        )        
        self.label.setText('Ожидайте заавершения операции ...')
        self.movie = QtGui.QMovie('loading.gif')       # тут ваша .gif
        self.label_movie.setMovie(self.movie)        
        self.movie.start()
        self.label_movie.show()
        
        if self.thread is None:
            self.thread = WorkThread(self.numStart, self.numEnd)
            self.thread.threadSignal.connect(self.on_threadSignal)
            self.thread.finished.connect(self.threadFinished)
            self.thread.start()
        else:
            self.label_movie.close()
            self.thread.terminate()
            self.thread = None

    def on_threadSignal(self, num):
        self.label.setText(f'Ожидайте заавершения операции... {num}')        
        self.numStart = num + 1

    def threadFinished(self):
        self.movie.stop()
        self.label_movie.close()
        self.thread = None
        self.button.setIcon(QIcon('off.png'))
        if self.numStart+1 == self.numEnd:
            self.numStart = 0
            self.button.click()
            
    def closeEvent(self, event):
        if self.movie:
            self.movie.stop()
            self.label_movie.close()
        self.thread = None
    

Stylesheet = '''
#centralWidget {
    background-color: rgb(54, 54, 54);
}
#label {
    background-color: rgb(84, 74, 54);
    color: #D9AC00;
    font-size: 24px;
}
#button {
    border: rgb(0, 0, 0);
}
'''


if __name__ == "__main__":
    app = QApplication(sys.argv)
    app.setStyle(QStyleFactory.create("fusion"))
    app.setStyleSheet(Stylesheet)
    w = MainWindow()
    w.resize(600, 400)
    w.show()
    sys.exit(app.exec_())

off.png

on.png